L'Ornithine Carbamoyltransférase De Pyrococcus Furiosus: Le Promoteur Du Gène Et La Structure De L'enzyme.
Martine ROOVERS, Christianne LEGRAIN, André PIERARD et Nicolas GLANSDORFF.
Microbiologie VUB et ULB, Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie et Institut de Recherches du CERIA-COOVI. Av. E. Gryzon, 1. B-1070 Bruxelles.
L'ornithine carbamoyltranférase (OTCase) de l'archéobactérie hyperthermophile
Pyrococcus furiosus a été caractérisée, et son gène cloné et séquencé. La séquence de ce clone
démontre, en amont du gène de structure de l'enzyme, des séquences typiques de promoteurs
d'archéobactéries. Selon la source et la technique utilisée pour l'extraction d'ARN (in vivo ou
in vitro), on a pu observer différents sites d'initiation de transcription.
L'OTCase de Pyrococcus a été purifiée complètement ; c'est un dodécamère fort thermostable.
Des expériences de mutagénèse dirigée visant à déterminer les résidus impliqués dans cette
thermostabilité sont en cours. Les enzymes mutantes seront exprimées dans la levure
Saccharomyces cerevisiae. La modélisation de l'enzyme effectuée à l'Institut de Biologie
Structurale du CNRS à Grenoble sur la base des coordonnées de l'OTCase catabolique de
Pseudomonas aeruginosa (1) permettra d'affiner cette recherche. Les résultats de cette
modélisation révèlent que des interactions interfaciales de type hydrophobes jouent un rôle
majeur dans la thermostabilisation de l'enzyme.
Référence
- Villeret, V., Tricot, C., Stalon, V. & Dideberg, O. (1995)
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 10762-10766.