Réplication Du Plasmide pGT5 Provenant De La Souche D'Archaebacterie Hyperthermophile Pyrococcus Abyssi
Stéphanie MARSIN, Nadia ROLLET, Patrick FORTERRE
Institut de Génétique et Microbiologie, BMGE, Université Paris Sud, Bât. 409 91405 Orsay Cedex
Pyrococcus abyssi est une archaébactérie hyperthermophile issue d'une source
hydrothermale sous-marine profonde dont la température de croissance est comprise entre 70 et
100*C.
La souche GE5 contient un plasmide de 3,5 kilobases appelé pGT5, dont la séquence a
été entièrement déterminée. L'analyse de celle-ci montre l'existence d'une phase ouverte de
lecture codant pour un polypeptide dont la séquence en acides aminés présente beaucoup de
similarités avec les protéines Rep des plasmides bactériens du type pC194. Il s'agit d'une
famille de plasmides qui se répliquent par le mécanisme dit du cercle roulant (RC), et qui
nécessitent la présence de deux origines de réplication distinctes, l'une double brin (dso pour
double-strand origin) l'autre simple brin (sso pour single-strand origin). Des séquences de ce
type ont été mises en évidence dans le plasmide pGT5. L'analyse de la séquence de la sso de
pGT5 a montré qu'elle est analogue au site de reconnaissance de la primase bactérienne DnaG
de E. Coli. La réplication de ce plasmide serait donc primosome dépendante.(1)
De plus, une forme simple chaîne du plasmide a été détectée dans les cellules de P. abyssi (1), cette forme étant un intermédiaire caractéristique identifié dans le mode de réplication
de type RC. Ces données nous permettent de conclure que le plasmide pGT5 se réplique
probablement par un mécanisme de type cercle roulant.
Les protéines Rep des plasmides cercle roulant sont apparentées aux topoisomérases de
typeI, elles possèdent en effet à la fois les activités d'endonucléase et de ligase. En vue d'une
étude in vitro de la protéine Rep de pGT5, le gène vient d'être cloné dans un vecteur de
surexpression chez E. coli.
Référence
- Gael Erauso, Stephanie Marsin, Nadia Benbouzid-Rollet, Marie-France Baucher, Tristan Barbeyron, Yvan Zivanovic, Daniel Prieur and Patrick Forterre (1996)
Sequence of Plasmid pGT5 from the Archaeon Pyrococcus abyssi : Evidences for Rolling-Circle Replication in a Hyperthermophile
J. Bacteriol. , 178, 3232-3237